Spôsoby, ako sa vyhnúť kontaminácii buniek: Tipy na pipetovanie, ktoré potrebujete vedieť
Spomedzi mnohých premenných, ktoré sú kontrolované v bunkovej kultúre, ovplyvňuje celý experiment jedna špecifická premenná: kontaminácia. Jeden faktor, ktorý prispieva k bunkovej kontaminácii, nie je vždy na radare, a hoci môže ticho ovplyvniť zdravie buniek a ovplyvniť namerané údaje, je to kontaminácia pipetovaním.
Výberu pipiet, špičiek pipiet a pipetovacích programov sa pri navrhovaní experimentov venuje malá pozornosť. Dokonca aj krycí roztok (autoklávovanie), aby sa zabránilo kontaminácii pipetovaním, nemusí byť také účinné, ako sa bežne verí.
Prvé pravidlo bunkovej kultúry: vyhnúť sa kontaminácii. Prečo je sterilná technika taká dôležitá pre úspešnú kultiváciu buniek?
Aseptická technika je jediný spôsob, ako dosiahnuť spoľahlivé a reprodukovateľné výsledky. Znečistenie môže ovplyvniť rast buniek, metabolizmus a zdravie -- niečo, čo vedci zaujímajú. Kontaminované bunkové línie nemajú požadované vlastnosti a fungujú vždy inak v závislosti od závažnosti kontaminácie. Tiež, ak kontaminanty prerastú vaše zaujímavé bunky, môžete skončiť štúdiom nesprávneho organizmu.
S akými druhmi škodlivín sa vedci často stretávajú?
Bežnými zdrojmi kontaminácie sú baktérie, kvasinky a plesne. Pri práci s bunkovou kultúrou je najťažšie detekovať a eradikovať mykoplazmu. Medzi menej bežné typy kontaminácie patria napríklad plastové výluhy v laboratórnych spotrebných materiáloch.
Aké sú bežné príčiny kontaminácie buniek?
Bežným zdrojom kontaminácie je zlé pipetovanie, ako napríklad používanie kontaminovaných pipiet a nefiltrovaných špičiek. Problémom je aj nedostatok osvedčených laboratórnych postupov, ako napríklad nedostatočná dekontaminácia nástrojov, ako sú inkubátory alebo skrine s laminárnym tokom. Na odstránenie mykoplazmy je potrebná filtrácia pomocou 0.1 µm filtra namiesto 0.2 µm filtra.
Tri kontaminácie pri pipetovaní:
1. Kontaminácia medzi pipetou a vzorkou: Pipeta alebo špička pipety kontaminuje vzorku.
Ako sa vyhnúť:
Používajte sterilné filtračné špičky, aby ste zabránili kontaminácii tela pipety.
Po každej vzorke vymeňte špičku pipety.
Pipety pravidelne sterilizujte v autokláve alebo sterilizujte etanolom. Vyberte pipetu kompatibilnú s autoklávom.
2. Kontaminácia medzi vzorkou a pipetou: Pipetovaním vzorky do tela pipety sa pipeta kontaminuje.
Ako sa vyhnúť:
Použite filtračné špičky alebo špičky s pozitívnym posunom, aby ste zabránili vniknutiu vzoriek do tela pipety.
Pri pipetovaní držte pipetu vo vertikálnej polohe. Skladujte pipetu vo zvislej polohe.
Pri pipetovaní nakloňte fľašu.
Uvoľnite tlačidlo pomaly, aby ste zabránili striekaniu vzorky do pipety. Vyberte si pipetu vybavenú funkciou mäkkého vysunutia.
3. Medzivzorková kontaminácia: Zvyškové pipetované vzorky sa prenesú do ďalšej vzorky. Zvyčajne sa vyskytuje, keď sa rovnaký hrot použije viackrát.
Ako sa vyhnúť:
Po každej vzorke vymeňte špičku pipety.
Použite filtračné špičky alebo špičky s pozitívnym posunom, aby ste zabránili vniknutiu vzorky do tela pipety a na ďalšiu vzorku.
Uistite sa, že špička pipety je na pipete utesnená, aby sa zabránilo úniku vzorky. Napríklad tip Yongyue Medical.
Existujú faktory kontaminácie, o ktorých vedci možno ani nevedia?
Účinnosť autoklávovania často nie je overená a ak autokláv nefunguje správne, hroty autoklávovaných pipiet nemusia byť sterilné. Vopred sterilizované filtre zabalené v ochrannom obale sú najbezpečnejšou možnosťou, ako takýmto nehodám predchádzať. Proces predsterilizácie pre vysokokvalitné špičky pipiet sa pravidelne overuje, aby sa zabezpečila účinnosť predsterilizácie.
Ako nástroje na pipetovanie a dávkovanie uľahčujú vedcom manipuláciu so vzorkami v sterilnom prostredí?
Výber správnych pipiet a pipetových špičiek môže uľahčiť aseptický pracovný postup. Lekárske pipety Yongyue sa ľahko čistia a otvárajú bez náradia, čo urýchľuje každodenné čistenie. Keďže autoklávovanie je účinnejšie pri odstraňovaní kontaminácie ako etanolové utierky, mechanické pipety Sartorius sú plne autoklávovateľné, čo znamená, že môžete svoje pipety spoľahlivo dekontaminovať. Mäkké vysunutie hrotu zabraňuje potenciálnemu riziku kontaminácie z rozstrekovania pri vysúvaní hrotu. Vopred sterilizované filtračné špičky chránia vaše vzorky pred krížovou kontamináciou. Lekárske špičky Yongyue sú tiež zabalené v nepriepustnom obale, čo znamená, že akákoľvek kontaminácia za podmienok skladovania a dodania nepríde do kontaktu so špičkami alebo škatuľkou na špičky.
Ako sa môžu vedci vyhnúť znečisteniu? Aké sú vaše najlepšie tipy na sterilnú prácu?
Po prvé, správna laboratórna prax a starostlivé plánovanie pracovných krokov. Uistite sa, že v komore s laminárnym prúdením uchovávate len to, čo je potrebné pre konkrétny pracovný postup, a súčasne používajte jednu bunkovú kultúru. Navyše pravidelné testovanie na kontaminanty, ako je mykoplazma, vám dáva pokoj a dôveru vo vaše výsledky. Keď pracujete v sterilných podmienkach, peniaze vynaložené na vopred sterilizované filtračné špičky a sterilné činidlá stoja za tie peniaze.
