Ako sa hovorí, ak chce robotník odviesť dobrú prácu, musí si najprv nabrúsiť náradie. Výber spotrebného materiálu je veľmi dôležitý na získanie uspokojivých výsledkov experimentu PCR. Pri analýze výsledkov PCR sa často zameriavame na analýzu primerov, koncentrácie enzýmu, teploty a času, ale ignorujeme, že spotrebný materiál PCR je tiež jedným z ovplyvňujúcich faktorov. Existuje mnoho typov spotrebného materiálu pre PCR, ako si vybrať správny spotrebný materiál pre PCR? Tu je niekoľko otázok, ktoré vám pomôžu nájsť odpoveď.
pcr spotrebný materiál
1. Prečo sa spotrebný materiál PCR vo všeobecnosti vyrába z PP?
Či už ide o bežnú PCR alebo fluorescenčnú kvantitatívnu PCR v reálnom čase (qPCR), zvyčajne bude jej spotrebný materiál v priamom kontakte s činidlami alebo vzorkami, takže pri výrobe a procese prípravy sú potrebné vysokokvalitné materiály a dobré techniky spracovania. Všeobecný spotrebný materiál je vyrobený z polypropylénu (PP). Polypropylén (PP) je biologicky inertný materiál, povrch nie je ľahko priľnavý k biomolekulám a má dobrú chemickú odolnosť a teplotnú toleranciu.
2. Ako si vybrať PCR skúmavky/doštičky s rôznymi objemami?
Bežné objemy pre PCR skúmavky/doštičky:
• Jedna skúmavka/{{0}}tuba/12-tuba: 0,5 ml, 0,2 ml, 0,1 ml
• {{0}}doštička s jamkami: 0,2 ml, 0,1 ml
• {{0}}doštička s jamkami: 0,02 ml
Špecifikácie pre PCR skúmavky/doštičky:
Vyberte vhodný produkt podľa špecifických experimentálnych požiadaviek. Objem väčšiny skúmaviek PCR môže spĺňať požiadavky PCR reakcií. Špecifikácie kapacity sú dostupné v štandardnej kapacite a nízkej kapacite. Vo všeobecnosti sa odporúča najskôr zvoliť nízkokapacitné trubice. Pretože rúrky/dosky nízkoobjemového reaktora majú menšiu výšku priestoru, zlepšuje sa prenos tepla a znižuje sa odparovanie. Zároveň je potrebné vyhnúť sa pridávaniu príliš veľkého alebo príliš malého množstva vzorky pri pridávaní vzoriek. Príliš veľa môže viesť k zníženej tepelnej vodivosti, rozliatiu a krížovej kontaminácii, zatiaľ čo príliš málo môže spôsobiť stratu vzorky pri odparovaní.
3. Aký je rozdiel medzi plochým krytom/konvexným krytom jednej rúrky alebo 8-radovej rúrky?
Ak je objem vzorky malý, uprednostňuje sa jedna skúmavka alebo {{0}}skúmavky. Ak je však požiadavka na reakčný objem veľká, prevládajú jednotlivé skúmavky a objem môže dosiahnuť 0,5 ml. Existujú dva typy jednej trubice a 8-trubice s plochým krytom a konvexným krytom, z ktorých každá má svoje výhody. Plochý uzáver poskytuje presné dodanie fluorescenčného signálu pre qPCR; jednoduché písanie na fixky. Konvexný kryt je v kontakte s krytom prístroja PCR, aby sa znížila deformácia skúmavky spôsobená tlakom; ovplyvní to však prenos fluorescenčných signálov a nedá sa použiť na experimenty qPCR.
4. Aké sú rozdiely v scenároch použitia rôznych 96-doštičiek s jamkami?
96-doštičky s jamkami sa vo všeobecnosti delia na doštičky bez obruby, doštičky s polovičnou obrubou a platne s plnou obrubou.
Doštičky bez okrajov: Kompatibilné s väčšinou termocyklerov alebo strojov qPCR, ale nie sú vhodné pre automatizované aplikácie. Stabilita počas procesu pipetovania nie je vysoká a je potrebné ho použiť s držiakom doštičiek.
Poloobrubová doska: Môže byť prispôsobená na označenie alebo aplikáciu čiarového kódu a automatickú aplikáciu a má dobrú stabilitu pri pipetovaní.
Plná obruba: veľmi vhodná pre automatizované laboratórne aplikácie, ale tiež vhodná pre aplikácie štítkov a čiarových kódov. Dobrá mechanická pevnosť, vhodná pre PCR stroje s vyčnievajúcimi modulmi a vysoká stabilita pri pipetovaní.
5. Je materiál doštičky/skúmavky PCR hrubší a stabilnejší?
č. Spotrebný materiál PCR musí mať jednotnú hrúbku steny, aby sa zabezpečil konzistentný prenos tepla. Ultratenká stena trubice je o 50 percent tenšia ako štandardná verzia, čo môže ešte viac znížiť tepelnú bariéru, čo má za následok rýchlejšiu a lepšiu odozvu.
6. Prečo nie sú orezané rohy a štítky rovnaké v prípade platní s 96-jamkami alebo 384-jamkami?
Rohové rezanie: Voľba polohy rohového rezu PCR doštičky závisí od požiadaviek prispôsobeného nástroja na jednoduché umiestnenie.
Identifikácia: Alfanumerické značky na doštičkách PCR pomáhajú identifikovať jednotlivé jamky a umiestnenia vzoriek. Vo všeobecnosti ide o vyvýšené logo s farebným číslom alebo gravírované logo. Pri niektorých automatizovaných aplikačných experimentoch bude reakčná doska s vytlačenými značkami lepšie utesnená.
7. Niektoré jamky doštičky PCR vyčnievajú, zatiaľ čo iné sú ploché. Ktorý je lepší?
Čo je vhodné, to je dobré. Bežné PCR platne majú dva typy: ploché okraje jamiek a zvýšené okraje jamiek. Reakčná doska s plochým okrajom jamky, vhodná pre väčšinu termocyklerov. Reakčná doska na okraji stúpacieho otvoru je vhodná na utesnenie, čo môže znížiť riziko krížovej kontaminácie medzi vzorkami.
8. Ako si vybrať PCR skúmavky/doštičky rôznych farieb?
Pre bežné PCR reakcie sa môžu použiť transparentné reakcie. Pri reakcii PCR v reálnom čase je citlivosť a konzistencia bielej skúmavky relatívne vyššia. Biele steny trubice zabraňujú prechodu fluorescencie stenami trubice a lomu, čím zabraňujú prechodu fluorescencie do vykurovacieho modulu, jej absorbovaniu modulom alebo nekonzistentnému odrazu. V porovnaní s priehľadnými trubicami možno na vrchu bielych trubíc zbierať silnejšie a cielenejšie fluorescenčné signály.
