Technológia PCR je podobná prirodzenému procesu replikácie DNA a jej špecifickosť sa spolieha na oligonukleotidové priméry, ktoré dopĺňajú oba konce cieľovej sekvencie. PCR sa skladá z troch základných reakčných krokov: denaturácia, žíhanie a rozšírenie. Tento reakčný proces sa vykonáva v reakčnej nádobe PCR. S neustálym vývojom nástroja na zosilnenie génov zaznamenal reakčný kontajner aj postupný vývoj odstredivky z 1,5 ml na 0,2 ml (0,25 ml) na tenkostennú 0,2 ml určenú pre PCR. , 0,1 mllpcr trubice. S nárastom počtu PCR amplifikačných reakcií sa postupne vytvárajú vysoko priepustné nádoby na zosilnenie génov pre PCR prúžky a PCR platne.
PCR sa skladá z troch základných reakčných krokov: denaturácia-žíhanie-rozšírenie
Denaturácia šablóny DNA:
Po zohriatí dna šablóny na približne 94 °C na určitý čas sa dvojvláknová DNA šablóny DNA alebo dvojvláknová DNA vytvorená zosilňovaním PCR disociuje, aby sa mohla kombinovať s základným náterom, aby sa pripravila na ďalšie kolo reakcie.
Žíhanie (renaturácia) šablóny DNA s primérmi:
Potom, čo sa DNA šablóny denaturuje do jedného prameňa zahrievaním a teplota sa zníži na približne 55 ° C, priméry sa spárujú s komplementárnou sekvenciou jediného prameňa DNA šablóny.
Rozšírenie primérov:
Konjugát šablóny DNA používa dNTP ako reakčnú surovinu na syntetizovanie nového polo rezervovaného replikačného reťazca, ktorý dopĺňa reťazec DNA šablóny podľa princípu základného párovania a polo rezervovanej replikácie.
Základné princípy PCR technológie
Technológia sa opiera o enzymatickú syntéznu reakciu DNA polymerázy v prítomnosti šablóny DNA, primerov a štyroch deoxyribonukleotidov.
DNA polymeráza používa jednovláknovú DNA ako šablónu na začatie syntézy s malým kúskom dvojvláknovej DNA. Jeden alebo dva syntetické oligonukleotidové primery sú kombinované s komplementárnou sekvenciou v jednovláknovej šablóne DNA, aby vytvorili čiastočnú dvojvláknovú DNA.
Pri vhodnej teplote a prostredí dna polymeráza pridáva deoxymononukleotid na koniec základného náteru 3'-OH a používa ho ako východiskový bod na rozšírenie pozdĺž smeru šablóny 5'→3' na syntetizovanie nového reťazca komplementárneho vlákna DNA .
Rozdiel medzi PCR trubicami a odstredivými trubicami
PCR trubice:
Reakčná doska PCR je 96-jamka alebo 384-jamka, ktorá je špeciálne navrhnutá pre dávkové reakcie. Princíp spočíva v tom, že priepustnosť PCR stroja a sekvenceru je vo všeobecnosti 96 alebo 384.
Odstredivka trubica:
Odstredivka trubica nie je nevyhnutne PCR trubica. Existuje mnoho druhov odstrediviek podľa ich kapacity. Bežne používané sú 1,5 ml, 2 ml, 5 ml, 15 alebo 50 ml a najmenšia (250ul) môže byť použitá ako PCR trubica.
Ako si vybrať PCR trubice
Rozhodli sme sa umiestniť PCR trubice v nádeji, že vyberieme najpresnejšie miesto pre teplotu.
Najpresnejšou polohou teploty by mala byť poloha nad snímačom teploty pod modulom (bez ohľadu na nepresnú teplotu snímača).
Poloha snímača teploty rôznych PCR prístrojov je odlišná.
Napríklad AB 2720 má len jeden v strede, MJ 200 má tri senzory, ktoré sú dole vľavo, stredná a horná vpravo, Eppendorf by mal byť v riadku A alebo H a Dongshenglong 811 má tri teplotné senzory, B1-2 by sa mal vybrať , C1-2, C6-7, D6-7, B11-12, C11-12, C11-12, pretože tieto body sú teplotné presné body.