Pri ochoreniach spôsobených vírusovými infekciami možno na objasnenie typov liečených vírusov vykonať tieto dva typy inšpekcií:
1. Priama detekcia samotného vírusu
2. Dokáže detekovať antigén na povrchu vírusu a nukleovú kyselinu vírusu.
Test identifikoval protilátky produkované s cieľom odolať vírusu:
Za normálnych okolností si testovanie antigénu nevyžaduje vysoké laboratórne podmienky a je vhodné najmä na rozsiahly skríning v primárnych nemocniciach; testovanie protilátok je jednoduché a výsledky testu je možné získať za 10-15 minút. Detekcia nukleových kyselín vyžaduje veľa laboratórnych podmienok, občasný personál a vybavenie, ale stránka s výsledkami je najcitlivejšia a najpresnejšia.
Z 10 nových činidiel na detekciu nukleových kyselín koronavírusu, ktoré boli schválené, 8 z nich používa fluorescenčnú metódu PCR a zvyšné metódy detekcie sú kombinovaná metóda sekvenovania polymerizácie s ukotvením v sonde a čipová metóda amplifikácie pri konštantnej teplote.
1. Metóda fluorescenčnej PCR
Metóda PCR sa týka polymerázovej reťazovej reakcie, ktorá môže výrazne zvýšiť stopové množstvo DNA. Keď sa používa na detekciu nového koronavírusu, pretože nový koronavírus je RNA vírus, je potrebné pred vykonaním detekcie PCR reverzne prepísať vírusovú RNA do DNA.
Princíp fluorescenčnej PCR detekcie spočíva v tom, že ako postupuje PCR, reakčné produkty sa ďalej hromadia a úmerne tomu sa zvyšuje aj intenzita fluorescenčného signálu. Nakoniec sa zmena množstva produktu monitoruje zmenou intenzity fluorescencie, čím sa získa krivka fluorescenčnej amplifikácie.
Toto je v súčasnosti najčastejšie používaná metóda na detekciu nukleových kyselín nového koronavírusu. Nasledujúce faktory však môžu spôsobiť chyby vo výsledkoch testu:
Nesprávne skladovanie alebo nepredloženie na testovanie: RNA vírusy sa ľahko degradujú. Po získaní vzoriek pacientov je preto potrebné ich štandardizovaným spôsobom uskladniť a čo najskôr otestovať. V opačnom prípade bude výsledok testu pravdepodobne nepresný.
Chybová interpretácia výsledkov: V súčasnosti schválené testovacie produkty sa vyberajú na základe otvoreného čítacieho rámca 1a/b, obalového proteínu a nukleokapsidového proteínu nového genómu koronavírusu. Detekčné priméry a návrhy sond rôznych produktov sa však líšia a existujú rozdiely v detekcii a interpretácii segmentov s jedným cieľom, segmentov s dvoma cieľmi a segmentov s tromi cieľmi. Ak teda interpretácia nie je striktne vykonaná v súlade s rôznymi pokynmi, môže to viesť k nesprávnemu posúdeniu výsledku.
2. Metóda sekvenovania kombinovanej polymerizácie ukotvenej sondou
Táto detekcia spočíva hlavne v použití špeciálneho prístroja na detekciu génovej sekvencie nesenej nanosférami DNA na sekvenčnom sklíčku.
Tento druh detekcie má vysokú citlivosť a nie je ľahké prehliadnuť diagnózu, ale výsledky sú tiež ľahko ovplyvnené mnohými faktormi, vrátane:
Vzorky netestované včas: Podobne ako fluorescenčná metóda PCR môžu byť výsledky nepresné, ak nie sú uchovávané štandardizovaným spôsobom a testované čo najskôr.
Izbová teplota testovacieho miesta je príliš vysoká: Ovplyvní to aj presnosť výsledkov testu. Výsledky môžu ovplyvniť aj rôzne testovacie nástroje a súpravy.
3. Čipová metóda zosilňovania konštantnej teploty
Detekcia génových čipov je jednou z tradičných virologických diagnostických metód. Princíp detekcie je detekčná metóda vyvinutá na základe komplementárnych väzbových charakteristík nukleových kyselín, ktorú možno použiť na kvalitatívne alebo kvantitatívne meranie nukleových kyselín prítomných v organizmoch. V porovnaní s PCR má génový čip vyššiu presnosť a kratší čas, ale je tiež drahší a priepustnosť detekcie (množstvo údajov, ktoré je možné vygenerovať za jednotku času) je relatívne nižšia.
Tentoraz schválený termostatický čip dokáže odhaliť šesť typov respiračných vírusov vrátane nového koronavírusu. Výsledky možno získať do 1,5 hodiny,
V porovnaní s PCR má génový čip vyššiu presnosť a kratší čas, ale cena je drahšia a priepustnosť detekcie (množstvo údajov, ktoré je možné vygenerovať za jednotku času) je relatívne nižšia.
4. Detekcia vírusových protilátok
Činidlá na detekciu protilátok sa používajú na detekciu protilátok IgM alebo IgG produkovaných ľudským telom po preniknutí vírusu do ľudského tela. IgM protilátky sa objavia skôr a IgG protilátky sa objavia neskôr.
V súčasnosti päť nových činidiel na detekciu protilátok proti koronavírusu, ktoré boli schválené, používa metódu koloidného zlata a metódu chemiluminiscencie magnetických častíc.
5. Metóda koloidného zlata
Metóda koloidného zlata využíva na testovanie koloidný zlatý testovací papier, čo je v súčasnosti často označovaný rýchly testovací papier.
Tento druh testovacieho papierika je špeciálne označený a má na sebe otvory, ktoré sa používajú na odkvapkávanie vzorky séra vyšetrovaného. Na testovacom papieri z koloidného zlata sú dve čiary, jedna sa nazýva testovacia čiara a druhá sa nazýva čiara kontroly kvality. Ak sú obe čiary farebné, znamená to pozitívne; zafarbená je iba čiara kontroly kvality, čo znamená negatívnu; okrem týchto dvoch prípadov patrí do Neplatný výsledok.
