Polymerázová reťazová reakcia (PCR) je jednou z najznámejších metód v laboratóriách biologických vied.
PCR platne sú vyrobené z prvotriedneho plastu pre vynikajúcu manipuláciu a analýzu odobratých vzoriek alebo výsledkov.
Majú tenké, rovnomerné steny, ktoré poskytujú presný prenos tepla.
Pri príprave na aplikáciu v reálnom čase sa izolujú malé frakcie DNA alebo RNA a uložia sa na doštičky PCR.
PCR platne sú veľmi účinné pri tepelnom tesnení a tiež obmedzujú tok tepla.
Avšak, pretože PCR platne sú účinné a spoľahlivé, sú náchylné na chyby a nepresnosti pri spracovaní vzoriek.
Takže ak máte záujem získať kvalitné PCR platne. Najlepšie je kontaktovať spoľahlivého výrobcu PCR platní. Vďaka tomu si môžete byť istí, že získate najlepšiu cenu.
Nižšie sú uvedené niektoré preventívne opatrenia, aby sa zabránilo kontaminácii činidiel alebo vzoriek a aby sa predišlo nepresným výsledkom.
Dezinfikujte prostredie
Nesprávne pozitívne alebo negatívne výsledky v dôsledku prítomnosti nečistôt môžu spôsobiť pochybnosti o výsledkoch.
Nečistoty a kontaminanty prichádzajú v rôznych formách, ako napríklad nesúvisiaca DNA alebo chemické prísady, ktoré v konečnom dôsledku znižujú účinnosť a efektivitu reakcie.
Existuje mnoho spôsobov, ako výrazne znížiť mieru kontaminácie PCR platní.
Použitie sterilizovaných filtračných špičiek je ďalším užitočným spôsobom, ako zabrániť vniknutiu nečistôt do vzorky cez pipetu.
Úplne čistá sada zariadení vrátane pipiet a stojanov sa poskytuje špeciálne na použitie PCR. To zaručí zanedbateľný prenos nečistôt alebo kontaminantov po laboratóriu.
Na utretie kontaminácie použite bielidlo, etanol na pipety, stojany a stoly.
Prideľte vyhradený priestor pre všetky PCR reakcie, aby ste ešte viac znížili kontamináciu časticami.
Pri každom kroku používajte čisté rukavice a často ich vymieňajte.
PCR platňa
Skontrolujte koncentráciu a čistotu šablóny.
Čistota lavíc a zariadení používaných na analýzu vzoriek pomocou PCR by sa mala udržiavať. Pred analýzou a spracovaním je dôležité overiť čistotu vzoriek.
Analyzátor zvyčajne berie do úvahy koncentráciu a úroveň čistoty vzorky DNA.
Pomer absorbancie 260nm/280nm by nemal byť menší ako 1,8. Nečistoty sa potom identifikovali pomocou vlnových dĺžok medzi 230 nm a 320 nm.
V jednom príklade boli chaotropné soli a iné organické zlúčeniny detegované pri absorbancii 230 nm. Súčasne detegujte a overte zákal vo vzorkách DNA pri absorbancii pri 320 nm.
Vyhnite sa preťaženiu PCR platní a produktov
Hoci je žiaduce spustiť viacero produktov súčasne, môže to viesť ku krížovej kontaminácii PCR platní.
Preťažovanie PCR platní rôznymi produktmi je zbytočné a sťažuje identifikáciu vzoriek.
Uchovávajte záznamy o alikvotných častiach PCR činidiel
Nepretržité cykly zmrazovania/rozmrazovania a časté používanie alikvótnych častí môžu rekryštalizáciou poškodiť reagencie PCR, enzýmy a DNTP.
Pri príprave vzoriek na analýzu sa vždy snažte monitorovať množstvo alikvotných častí.
Výhodný LIMS je vhodnejší na kontrolu zásob a množstiev činidiel a vzoriek, ktoré sa majú zmraziť alebo rozmraziť.
Zvoľte optimálnu teplotu žíhania.
Výber a použitie nesprávnej teploty žíhania je ďalším spôsobom, akým výsledky PCR obsahujú chyby.
Niekedy odpoveď nevyjde podľa plánu. Na podporu úspešnej reakcie je potrebné znížiť teplotu žíhania.
Zníženie teploty však zvyšuje možnosť falošne pozitívnych výsledkov a primérových dimérov.
Pri použití PCR platní je dôležité potvrdiť analýzu krivky topenia, pretože je to dobrý indikátor pre výber správnej teploty žíhania.
Softvér na návrh priméru pomáha pri návrhu, poskytuje správnu teplotu žíhania a priamo znižuje chyby v PCR platniach.
pcr tanier
